Poзроблення тест-системи на основі кількісної полімеразної ланцюгової реакції для детекції генетичного матеріалу збудника сибірки

Анотація

Мета. Розробити вітчизняну тест­систему для детекції ДНК збудника сибірки Bacillus anthracis у біологічному матеріалі та пробах із довкілля на основі кількісної полімеразної ланцюгової реакції (ПЛР) із використанням рекомбінантних контрольних зразків. Методи. Дослідження проводили у 2024–2025 рр. на базі Національного наукового центру «Інститут експериментальної і клінічної ветеринарної медицини» НААН із застосуванням молекулярного тимін­аденінового клонування (для виготовлення рекомбінантних контрольних зразків) і полімеразної ланцюгової реакції в режимі реального часу (для визначенням чутливості та специфічності тест­системи). Результати. Сконструйовано рекомбінантний позитивний контрольний зразок, що містить специфічний хромосомний маркер dhp61, а також внутрішній контрольний зразок, який дає змогу виявити інгібітори реакції та запобігає отриманню хибно­негативних результатів. Обидва компоненти інтегровано до складу експериментальної тест­системи Anthrax DNA­test, здатної детектувати хромосомний і плазмідні маркери збудника. Тест­система стабільно виявляє ДНК Bacillus anthracis у широкому діапазоні концентрацій, не реагує на гетерологічні зразки та демонструє повну відтворюваність результатів у разі повторних досліджень. За основними аналітичними характеристиками вона відповідає міжнародним вимогам до діагностичних засобів. Висновки. Створено й апробовано експериментальний набір компонентів для проведення надійної детекції збудника сибірки методом кількісної ПЛР із використанням рекомбінантних контрольних зразків. Запропонована тест­система є перспективною для впровадження у практику лабораторної діагностики, забезпечує можливість підвищення ефективності епізоотичного нагляду в Україні.